Detección de proteínas virales en tejido cerebral de ratón infectado por el virus de la rabia

Recoja secciones fijas del cerebro de ratones infectados con el virus de la rabia intracerebral a intervalos postmortem definidos.

El virus infecta las neuronas piramidales en la corteza cerebral, y las proteínas virales expresadas se localizan dentro de estructuras granulares intracitoplasmáticas conocidas como cuerpos de inclusión.

Trate las secciones con cloruro de amonio para neutralizar los grupos reactivos inducidos por la fijación y minimizar las manchas de fondo.

Sumerja las secciones en peróxido de hidrógeno para inactivar la peroxidasa endógena y reducir las señales inespecíficas.

Aplique una solución de bloqueo que contenga un detergente para permeabilizar las membranas celulares y enmascarar los sitios de unión inespecíficos.

Incubar con anticuerpos primarios específicos contra las proteínas virales.

Lavar e incubar con anticuerpos secundarios conjugados con biotina que se unen a los anticuerpos primarios.

Lavar de nuevo e introducir avidina conjugada con enzima peroxidasa, que se une a la biotina, seguida de un sustrato cromogénico que la enzima convierte en un producto coloreado.

Visualice los cuerpos de inclusión inmunorreactivos que contienen proteínas virales utilizando un microscopio.

Con el aumento del tiempo post mortem, se hace evidente la degradación neuronal y la desaparición de los cuerpos de inclusión.