Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:30 min. • March 4th, 2025
Obtener tejido de médula espinal fijado químicamente de ratones inducidos con desmielinización autoinmune en puntos de tiempo definidos durante la progresión de la enfermedad.
La enfermedad hace que las células inmunitarias autorreactivas ataquen a las proteínas de mielina, degradando la vaina de mielina que rodea los axones neuronales.
Las células precursoras de los oligodendrocitos se reclutan en el sitio afectado, maduran en oligodendrocitos y reforman la vaina de mielina.
Enjuague el tejido con un tampón para eliminar el exceso de fijador, luego trátelo con osmio, que se une a los lípidos de mielina y mejora el contraste para las imágenes.
Aplique tintes de metales pesados que se unan a las macromoléculas y mejoren el contraste.
Deshidratar el tejido utilizando concentraciones crecientes de alcohol. Toma el tejido incrustado en resina y obtén secciones ultrafinas.
Usando microscopía electrónica, mida el grosor de la vaina de mielina para clasificar los axones como desmielinizantes con una vaina hinchada y más gruesa, desmielinizados sin vaina o remielinizantes con una vaina delgada.
Identificar el daño axonal caracterizado por una reducción del espacio entre los neurofilamentos y la inflamación de las mitocondrias o una degeneración completa.
Analice la progresión del daño axonal y la reparación a lo largo del tiempo para evaluar la progresión de la enfermedad.