Preparación de secciones de cerebro de rata para el análisis de microscopía electrónica de la integridad de la barrera hematoencefálica

Tomemos como ejemplo una rata sometida a un flujo sanguíneo restringido al hemisferio derecho del cerebro, lo que provoca daños en la barrera hematoencefálica.

Inyecte por vía intravenosa albúmina marcada con fluoróforos, que atraviesa la barrera hematoencefálica dañada y llega al cerebro.

Obtener secciones cerebrales fijadas químicamente.

Agregue un tampón de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.

Aplique anticuerpos conjugados con peroxidasa dirigidos a la albúmina marcada con fluoróforos.

Agregue un sustrato cromogénico, que la peroxidasa convierte en un precipitado denso en electrones.

Introducir tetróxido de osmio para fijar los lípidos de la membrana y mejorar el contraste.

Deshidratar las secciones con concentraciones de alcohol crecientes.

Agregue acetato de uranilo, que se une a los ácidos nucleicos y proteínas para aumentar el contraste.

Deshidratar de nuevo con concentraciones de alcohol crecientes, terminando con óxido de propileno para la incrustación de resina. Incrusta las secciones en resina.

Identificar y extirpar microscópicamente las regiones teñidas de cromógeno.

Vuelve a incrustar estas secciones en resina y prepara rodajas ultrafinas.

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