Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:30 min. • March 4th, 2025
Tomemos como ejemplo una rata sometida a un flujo sanguíneo restringido al hemisferio derecho del cerebro, lo que provoca daños en la barrera hematoencefálica.
Inyecte por vía intravenosa albúmina marcada con fluoróforos, que atraviesa la barrera hematoencefálica dañada y llega al cerebro.
Obtener secciones cerebrales fijadas químicamente.
Agregue un tampón de bloqueo para evitar la unión de anticuerpos no específicos.
Aplique anticuerpos conjugados con peroxidasa dirigidos a la albúmina marcada con fluoróforos.
Agregue un sustrato cromogénico, que la peroxidasa convierte en un precipitado denso en electrones.
Introducir tetróxido de osmio para fijar los lípidos de la membrana y mejorar el contraste.
Deshidratar las secciones con concentraciones de alcohol crecientes.
Agregue acetato de uranilo, que se une a los ácidos nucleicos y proteínas para aumentar el contraste.
Deshidratar de nuevo con concentraciones de alcohol crecientes, terminando con óxido de propileno para la incrustación de resina. Incrusta las secciones en resina.
Identificar y extirpar microscópicamente las regiones teñidas de cromógeno.
Vuelve a incrustar estas secciones en resina y prepara rodajas ultrafinas.
Monte los cortes en rejillas de microscopía electrónica (EM).
Teñir con citrato de plomo para mejorar el contraste de la matriz extracelular.
Proceda con EM para examinar la integridad de BBB.