JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 1:30 min • March 4th, 2025
Tomemos como ejemplo un tejido cerebral humano fijado en formol incrustado en parafina. El tejido exhibe microbios patógenos presentes tanto en el interior de las células como extracelularmente.
Lavar para eliminar la parafina, luego rehidratar el tejido usando concentraciones de alcohol decrecientes.
Calentar con un tampón ácido para romper los enlaces cruzados de proteínas inducidos por la formalina, desenmascarando los epítopos antigénicos en las bacterias.
Incubar con cloruro de amonio para neutralizar los grupos de aldehído reactivos residuales formados durante la fijación, evitando la interacción inespecífica con los anticuerpos.
Tratar con un detergente para permeabilizar las membranas celulares, facilitando la penetración de los anticuerpos.
Aplique una solución bloqueante para evitar la unión de anticuerpos inespecíficos.
Incubar con anticuerpos primarios que se dirigen a microbios extracelulares e intracelulares.
Aplique anticuerpos secundarios conjugados con fluoróforos que se unen a los anticuerpos primarios.
Añade un tinte fluorescente de unión al ADN para teñir los núcleos.
Trate con un eliminador de autofluorescencia para apagar la fluorescencia de los gránulos intracelulares autofluorescentes, minimizando las señales de fondo.
Usando microscopía de fluorescencia, examine el tejido para confirmar la presencia de microbios.