Detección de proteínas Tau fosforiladas en muestras de cerebro de ratón mediante análisis de Western Blot

Comience con tejido cerebral de ratón en un tampón de extracción que contenga inhibidores de la proteasa y un detergente.

Homogeneizar el tejido para liberar proteínas en el tampón. Los inhibidores de la proteasa bloquean la actividad de la proteasa, evitando la degradación de las proteínas.

Centrifugar y recoger el sobrenadante con proteínas.

Agregue un tampón de carga que contenga detergente y un agente reductor para desnaturalizar la proteína.

Cargue las proteínas del control y la muestra en un gel SDS-PAGE. Aplique un campo eléctrico para separar las proteínas en bandas distintas.

Después de la electroforesis, transfiera las bandas de proteínas a una membrana.

Trate la membrana con un tampón que contenga leche descremada para bloquear los sitios de interacción no específicos.

Incubar con anticuerpos primarios que se unen específicamente a las proteínas tau fosforiladas.

Lavar e incubar con anticuerpos secundarios conjugados con enzimas.

Añade un sustrato que reaccione con la enzima para producir una señal de luz, confirmando las proteínas tau fosforiladas.

Una banda luminosa intensa en la muestra en comparación con el control sugiere una patología neurodegenerativa.