Detección de alfa-sinucleína fosforilada mediante Western Blotting

0 vistas1:30 min • March 4th, 2025

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Comience con las proteínas del LCR, incluida la alfa-sinucleína fosforilada, un biomarcador de enfermedades neurodegenerativas.

Agregue un tampón de carga que contenga un detergente, un agente reductor y un tinte de seguimiento.

Caliente para desnaturalizar las proteínas, luego cárguelas en un gel SDS-PAGE.

Realizar electroforesis para separar las proteínas por peso molecular en bandas distintas.

Incubar el gel en un tampón secante con agitación.

A continuación, electrotransfiere las bandas de proteínas del gel a la membrana.

Trate la membrana con un fijador para retener la proteína en la membrana, luego lave.

Incubar con una solución bloqueante que contenga anticuerpos primarios e inhibidores de la fosfatasa para mantener la fosforilación de la alfa-sinucleína.

Los anticuerpos interactúan exclusivamente con la alfa-sinucleína fosforilada y los reactivos bloqueantes bloquean los sitios de interacción inespecíficos y luego se lavan.

Introducir anticuerpos secundarios conjugados con enzimas que interactúan con los anticuerpos primarios y, a continuación, lavar.

Añade un sustrato quimioluminiscente, interactuando con las enzimas y generando una quimioluminiscencia.

Una banda quimioluminiscente confirma la presencia de alfa-sinucleína fosforilada.

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Última actualización: 22 agosto 2026