Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:23 min. • March 4th, 2025
Tome una sección rehidratada de tejido cerebral humano enfermo que contenga cuerpos de Lewy, o LB.
Incubar con solución de peróxido de hidrógeno para inhibir las peroxidasas endógenas y evitar tinciones inespecíficas.
Calentar la sección en tampón de citrato para desenmascarar los epítopos de alfa-sinucleína en los LB.
Aplique un agente bloqueante para evitar la unión de anticuerpos inespecíficos.
Retire el exceso de agente bloqueador e incube la sección con anticuerpos primarios dirigidos a la alfa-sinucleína.
Lavar los anticuerpos no unidos.
Aplicar anticuerpos secundarios biotinilados que se unen a los anticuerpos primarios.
Elimina el exceso de anticuerpos.
Agregue complejos de estreptavidina-biotina-peroxidasa, que se unen a los anticuerpos secundarios biotinilados.
Lavar los complejos sueltos.
Aplique un sustrato productor de color que reaccione con la peroxidasa, formando precipitados marrones.
Retira el exceso de sustrato.
Tratar con una contratinción para colorear los núcleos de azul, mejorando el contraste contra la alfa-sinucleína teñida de marrón dentro de los LB en el citoplasma neuronal bajo un microscopio.