Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:27 min. • March 4th, 2025
Aislar el nervio óptico de ratones transgénicos con lesiones cerebrales a intervalos definidos después de la lesión. El nervio contiene neuronas que expresan una proteína fluorescente.
Mediante microscopía de fluorescencia, visualice el nervio lesionado, que presenta un aumento progresivo de las hinchazones y desconexiones axonales.
Fijar el tejido para preservar las estructuras celulares.
Enjuague el pañuelo para eliminar el exceso de fijador.
Trate con una solución de osmio-ferrocianuro que se une a los lípidos de la vaina de mielina y mejora el contraste para la obtención de imágenes.
Enjuague el tejido, luego incube en un compuesto de metal pesado que se une a las macromoléculas y mejora el contraste.
Deshidrata el tejido utilizando concentraciones crecientes de alcohol e incrusta en una resina.
Obtener secciones transversales y longitudinales y tratarlas con compuestos de metales pesados, mejorando el contraste.
Bajo un microscopio electrónico, las secciones longitudinales revelan un desarrollo progresivo de hinchazones axonales con mitocondrias inflamadas acumuladas, vesículas, ampollas de membrana y estructuras citoesqueléticas alteradas.
Las secciones transversales muestran una disrupción progresiva de las vainas de mielina, lo que indica degeneración axonal.