Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:29 min. • March 4th, 2025
Comience con un trozo de cerebro rico en neuronas dopaminérgicas.
Incubar el corte en un líquido cefalorraquídeo que contenga falsos neurotransmisores fluorescentes o FFN.
Los FFN son marcadores sensibles al pH que imitan a la dopamina y emiten fluorescencia más intensamente en ambientes neutros que ácidos.
Estas FFN entran selectivamente en las neuronas dopaminérgicas y se cargan en vesículas sinápticas ácidas, donde el cambio de pH reduce la fluorescencia de las FFN.
Transfiera este corte a una cámara de imágenes, asegúrelo y perfunde continuamente con aCSF para eliminar las FFN no unidas.
Visualice el corte para confirmar la acumulación de FFN como puntos fluorescentes.
A continuación, coloque un electrodo estimulante para administrar la estimulación eléctrica.
Los pulsos eléctricos hacen que el calcio entre en la neurona, lo que provoca la fusión de la vesícula sináptica con la membrana neuronal y la liberación de FFN en la hendidura sináptica extracelular.
En el entorno de pH neutro de la hendidura sináptica, la fluorescencia de FFN se intensifica.
Vuelva a obtener imágenes del corte para observar la fluorescencia difusa en el espacio extracelular, lo que confirma la liberación de FFN de las vesículas sinápticas.