Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:28 min. • March 4th, 2025
Comience con el líquido cefalorraquídeo, o LCR, recolectado de personas de diversas edades.
Centrifugar la muestra para pellets los restos celulares y recoger el sobrenadante.
El sobrenadante contiene proteínas implicadas en la generación de neuronas o neurogénesis.
Tome una placa multipocillo recubierta con estreptavidina. Agregue un agente de bloqueo para evitar el enlace no específico.
Agregue anticuerpos de captura marcados con biotina selectivos a las proteínas específicas relacionadas con la neurogénesis.
Incubar con agitación para unir los anticuerpos a la estreptavidina, luego lavar la placa.
Agregue la muestra de líquido cefalorraquídeo junto con los anticuerpos de detección marcados con rutenio a los pocillos, luego incube con agitación.
Las proteínas específicas relacionadas con la neurogénesis se unen para capturar anticuerpos e interactúan con los anticuerpos de detección simultáneamente.
Lave bien la placa y agregue un tampón de detección.
Coloque la placa en un sistema de imágenes.
El tampón de detección desencadena la emisión de luz del rutenio.
Una disminución en la intensidad de la luz en las muestras indica reducciones relacionadas con la edad en los niveles de proteínas relacionadas con la neurogénesis, lo que confirma una disminución en la neurogénesis.