JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociencia
0 vistas • 1:29 min • March 4th, 2025
Comience con un cocultivo de astrocitos y la diferenciación de agregados de células madre neuronales en medios de diferenciación.
Los astrocitos secretan moléculas de señalización que mejoran la maduración y diferenciación de las células madre en neuronas y astrocitos.
A continuación, agregue un fijador para preservar la estructura celular, seguido de un lavado.
Agregue una solución de detergente para permeabilizar las membranas celulares, luego lave.
Introducir un reactivo de bloqueo para bloquear sitios de unión no específicos.
Añadir anticuerpos primarios que se unen específicamente a los marcadores proteicos de las neuronas maduras y los astrocitos. Lavar para eliminar los anticuerpos no unidos.
A continuación, añada los anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia verde y roja e incube. Estos anticuerpos se unen a los anticuerpos primarios respectivos, proporcionando una fluorescencia distinta a las células.
Introduce un tinte nuclear para teñir los núcleos de azul.
Por último, observe las células con un microscopio confocal.
Dentro de los agregados, las células fluorescentes verdes indican neuronas maduras, mientras que las células fluorescentes rojas representan astrocitos. Esto confirma las interacciones célula-célula en la facilitación de la maduración neuronal.