Microscopía electrónica de barrido de haz de iones focalizado para la reconstrucción 3D de neuronas unidas sinápticamente

Tome una sección fija de tejido cerebral cortical de ratón que exhibe axones neuronales y dendritas. Las dendritas poseen protuberancias, conocidas como espinas dendríticas, que forman sinapsis con los axones.

Incubar el tejido con osmio-ferrocianuro, que se une a los lípidos, seguido de otra aplicación de osmio, que mejora el contraste estructural para la obtención de imágenes.

Teñir con un compuesto de metales pesados que se une a las macromoléculas y mejora el contraste.

Deshidratar utilizando concentraciones crecientes de alcohol para la incrustación de resina.

Incrusta el tejido en resina, móntalo en un soporte y cúbrelo con oro para optimizar la calidad de la imagen.

Utilice la microscopía electrónica de barrido de haz de iones focalizada para obtener imágenes tridimensionales.

Emplee un haz de iones para eliminar una capa delgada de tejido incrustado en resina, exponiendo una superficie de imagen.

Enfoca un haz de electrones en la superficie expuesta y detecta los electrones retrodispersados para generar una imagen.

Realiza cortes en serie y reconstruye una imagen tridimensional, revelando una red neuronal cortical sinápticamente enlazada.