Contraste de imagen mejorada del buque utilizando MicroCT

El objetivo de esta técnica de obtención de imágenes de vasos con contraste mediante tomografía computarizada microscópica o micro TC es proporcionar un método óptimo para generar conjuntos de datos de alta calidad para el análisis de redes vasculares en ratones vivos. Esto se logra mediante la inyección intravenosa de un agente de contraste radio-opaco in vivo. Luego, el animal se prepara para la micro tomografía computarizada induciendo anestesia y colocando al animal de manera segura en una cámara multimodal para reducir los artefactos de movimiento durante las micro tomografías computarizadas.

Después de las exploraciones, los datos de la micro TC se reconstruyen y se cargan en el software de visualización. El paso final del procedimiento es ajustar los parámetros de la función de transferencia bidimensional para mejorar la visibilidad de los vasos sanguíneos y proporcionar diferentes colores a los vasos sanguíneos, el hueso y el tejido blando con fines de distinción. En última instancia, se pueden obtener resultados que muestran la red vascular en animales vivos a través de imágenes mejoradas con contraste opaco por TC y representación de la función de transferencia bidimensional.

Hola, soy Sue Resh, PJA Patti del Centro de Imágenes de Animales Pequeños del Departamento del Instituto de Investigación del Cáncer Infantil del Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Texas, San Antonio. Soy Charles Keller, también del Instituto de Investigación del Cáncer Pediátrico Greehey del Centro de Ciencias de la Salud de la Universidad de Texas, en San Antonio. Hoy le mostraremos un procedimiento para la visualización de vasos sanguíneos en animales vivos utilizando un agente de contraste de reserva de sangre radioopaco.

Utilizamos este procedimiento en nuestros laboratorios para estudiar los vasos intermedios y grandes de tumores espontáneos complejos en nuestros ratones transgénicos. Así que comencemos. Para comenzar este procedimiento, obtenga 0,2 mililitros por 20 gramos de 20 miligramos de yodo por mililitro de sangre yodada Agente de contraste Xia one 60 xl utilizando una jeringa de insulina de 28 y medio cc de calibre 28 y medio.

Inyecte el agente de contraste en un ratón vivo a través de la vena distal de la cola 10 minutos después de la inyección. Prepare a los animales para la micro tomografía computarizada.

Primero, anestesiar a los animales en una caja acrílica conectada a 2% de flúor en 100% de oxígeno a 2,5 litros por minuto. Después de unos minutos, realice un pellizco en el dedo del pie para verificar la profundidad de la anestesia. A continuación, para minimizar los artefactos de movimiento, estabilice el mouse colocándolo en una cámara multimodal personalizada disponible en el mercado con provisión para aire y escape.

Mantener un suministro de aire con un 2% de flúor y un 100% de oxígeno para garantizar la anestesia continua del animal durante la exploración. Una vez que el ratón está preparado, se puede escanear en una unidad de micro TAC capaz de realizar exploraciones de animales vivos. Conecte la cámara multimodal que contiene el ratón a los tubos de escape de la recada.

Utilizando el escáner volumétrico de tomografía computarizada GE Explorer locus, el animal puede ser escaneado con una resolución de 93 micrómetros. Este escáner volumétrico utiliza un detector CCD de 3.500 por 1750 para la reconstrucción del haz cónico Feld Camp, estableciendo los parámetros independientes de la plataforma constantes con una corriente de 450 microamperios, un voltaje de un kilovoltaje DP y un tiempo de exposición de 100 milisegundos. Para lograr un contraste superior entre el hueso y el tejido blando del vaso, los parámetros estándar se pueden variar con cinco a ocho fotogramas por vista y un número de 360 a 720 vistas para una rotación completa de 360 grados, use un tiempo total de escaneo de aproximadamente 15 a 20 minutos después de la tomografía computarizada.

Reconstruya las imágenes con el software de haz EVS patentado por el fabricante. Continúe monitoreando el ratón hasta que esté completamente recuperado de la anestesia. Una vez reconstruidos, los datos de micro TC se pueden utilizar para la función de transferencia unidimensional o bidimensional de isosuperficie avanzada.

La representación de imágenes mediante el software de procesamiento de imágenes SEG 3D para representar una proyección bidimensional del conjunto de datos tridimensionales utiliza una función de transferencia bidimensional que mejora aún más la distinción entre vaso y hueso. Durante la representación de la imagen, asigne colores y opacidades a la muestra de rayos en función de la función de transferencia, que a su vez se basa en el valor CT y la magnitud del gradiente. Ajuste manualmente las funciones de transferencia en función de la orientación proporcionada por los histogramas de valores CT para resaltar las áreas y los objetos de interés que se muestran.

Estos son los resultados representativos que muestran una imagen de renderizado de la función de transferencia bidimensional en una micro tomografía computarizada de un ratón de tipo salvaje inyectado con Xia one 60 xl. Acabamos de mostrarte cómo generar conjuntos de datos de alta calidad para el análisis de redes vasculares en ratones vivos. Esta técnica podría muy bien utilizarse para la evaluación cualitativa y cuantitativa de la antiangiogénesis en estudios preclínicos con ratones transgénicos o xenoinjertos.

Al realizar este procedimiento, es importante recordar obtener una inyección perfecta del agente de contraste en la vena de la cola y colocar al animal de manera que se minimice el artefacto de movimiento que puede ocurrir debido a la respiración. Así que eso es todo. Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.