Evaluación de los efectos neuroprotectores de un compuesto de prueba contra la toxicidad de la alfa-sinucleína en neuronas embrionarias de rata
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 1:37 min. • August 7th, 2025
Comience con un cultivo primario del mesencéfalo de embriones de rata, que contiene neuronas dopaminérgicas que sobreexpresan alfa-sinucleína mutada.
Reemplace los medios en los pocillos de tratamiento con medios nuevos que contengan el compuesto de prueba, y los de los pocillos de control con medios simples. Luego incuba.
En el control, la alfa-sinucleína forma agregados tóxicos en las neuronas dopaminérgicas, causando retracción de neuritas y provocando la muerte neuronal.
En el tratamiento, el compuesto de prueba interactúa con la alfa-sinucleína, previene su agregación, preserva la estructura de la neurita y proporciona neuroprotección.
Fije y permeabilice las células, luego bloquee los sitios de unión no específicos.
Incubar con anticuerpos primarios para marcar todas las neuronas, con etiquetado adicional para neuronas dopaminérgicas.
Lave las células y agregue anticuerpos secundarios marcados con fluoróforo específicos para los anticuerpos primarios.
Usando un microscopio de fluorescencia invertida, cuente las neuronas dopaminérgicas marcadas diferencialmente, luego cambie a un microscopio confocal para medir la longitud de la neurita.
Un mayor recuento de neuronas dopaminérgicas co
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