Enfoque estereotáxico de cisterna magna para la administración terapéutica en un modelo de ratón

Comience con un ratón anestesiado en un marco estereotáxico con la cabeza inclinada.

Una incisión en el cuero cabelludo en el ratón expone la duramadre que cubre la cisterna magna, un espacio lleno de líquido cefalorraquídeo o LCR entre el cerebelo y el tronco encefálico.

Con fórceps, agarre la duramadre y cree una pequeña abertura en ella para acceder a la cisterna magna.

Use un hisopo estéril para eliminar el exceso de LCR.

Identifique el punto de referencia anatómico donde la médula espinal se conecta con el tronco encefálico, luego determine las coordenadas estereotáxicas.

Baje el brazo estereotáxico que sostiene la micropipeta, que contiene la solución terapéutica.

Avance la micropipeta a través de la cisterna magna hacia el tronco encefálico en las coordenadas predeterminadas.

Inyecte la solución lentamente y sostenga la pipeta brevemente para evitar el reflujo.

La solución terapéutica llega directamente a las regiones del tronco encefálico y la médula espinal superior, que son difíciles de alcanzar utilizando métodos estereotáxicos estándar.

Vea la superficie dorsal del tronco encefálico con puntos de referencia detallados a través de la duramadre abierta.

Use las pinzas en ángulo para agarrar la duramadre que se extiende desde el hueso occipital hasta el atlas, luego use las tijeras de resorte para hacer una pequeña abertura de aproximadamente 0.5 a 1.5 milímetros en la duramadre. Una vez abierta la duramadre, drene el exceso de líquido cefalorraquídeo con un hisopo estéril. El óblast, el punto donde el canal central se abre hacia el cuarto ventrículo, es el punto cero anteroposterior y mediolateral estándar.

Coloque la pipeta o jeringa en el objetivo usando el brazo estereotáxico. Baje el brazo de la dorsal sobre la superficie dorsal que se forma a partir del punto cero dorsoventral. Luego baje la pipeta sobre el tronco encefálico e inyecte la solución.

Deje la aguja en su lugar durante uno a cinco minutos después de la inyección para evitar una huella de aguja cuando use volúmenes entre 3 y 50 nanolitros. A continuación, levante la pipeta o la jeringa con el brazo estereotáxico y repita esto para múltiples objetivos.