Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Neurociencia
0 visualizaciones • 3:47 min. • August 29th, 2025
Asegure un ratón en un marco estereotáctico con un cerebro expuesto quirúrgicamente que contenga un esferoide de glioblastoma preimplantado.
Aplique solución salina en el cerebro expuesto para mantener la hidratación de los tejidos.
Coloque la sonda flexible sobre la capa salina, asegurándose de que sus almohadillas de contacto descansen sobre la parte posterior del mouse y los electrodos se alineen sobre el glioblastoma.
La sonda consiste en un sustrato de polímero delgado y flexible con electrodos de oro estampados recubiertos con polímero conductor biocompatible, lo que garantiza un rendimiento eléctrico óptimo y compatibilidad con tejidos.
Absorbe el exceso de solución salina, dejando solo una capa delgada.
Aplique adhesivo de silicona para estabilizar los electrodos, luego coloque una cubierta de vidrio.
Aplique cemento dental alrededor del vidrio de la cubierta y asegure las almohadillas de contacto a la parte posterior del mouse.
Construya un pozo de cemento para la inserción de fluidos.
Posteriormente, administrar analgesia postquirúrgica y mantener el soporte térmico para la recuperación del ratón.
Los electrodos implantados administran pulsos eléctricos por encima del glioblastoma para una terapia de campo eléctrico pulsado dirigida en aplicaciones neuroterapéuticas.
Coloque una gota de DPBS para cubrir la craneotomía. Coloque el electrodo flexible en la gota de DPBS y coloque suavemente la parte posterior de la sonda con las almohadillas de contacto en la parte posterior del mouse. Absorba la gota de DPBS con un pequeño trozo de papel hasta que la sonda pueda quedar plana sobre la duramadre y seguir la curvatura del cerebro, asegurándose de que la pequeña capa de solución salina permanezca debajo de los electrodos para actuar como una barrera contra el derrame de pegamento.
Coloque una pequeña gota de adhesivo de silicona sobre la sonda y cúbrala con un cubreobjetos redondo de cinco milímetros. Empuje el cubreobjetos hacia abajo hasta que la silicona se distribuya uniformemente y la distancia entre el cubreobjetos y la sonda sea mínima. Luego espere 30 segundos para que la silicona se solidifique.
Para asegurar la cubierta de vidrio, aplique rápidamente superpegamento en sus lados y empújelo hacia abajo hasta que el pegamento se solidifique. Aplique superpegamento en el cuello de la sonda con un palillo de dientes, teniendo cuidado de que el superpegamento se dibuje debajo del cuello para proporcionar un soporte estable. Cubra el cráneo con cemento dental para construir una tapa crónica y tenga especial cuidado de cubrir solo los bordes de la cubierta de vidrio.
Levante la parte posterior de la sonda y aplique cemento debajo del cuello de la sonda. Descanse la sonda sobre el cemento antes de que se cure. Empuje suavemente hacia abajo el cuello de la sonda para colocar su superficie al mismo nivel que el vidrio de cobertura y no en el camino del objetivo del microscopio durante el experimento.
Cubra la parte superior del cuello de la sonda con no más de 1,5 milímetros de capa de cemento dental para lograr una sujeción firme de la sonda. Construir un pozo de cemento que presente una cresta de 1,5 milímetros a uno o dos milímetros alrededor del vidrio de cubierta para crear un recipiente para el fluido de inmersión para las imágenes de dos fotones. Después de que el cemento se haya curado, administre analgesia posquirúrgica y mantenga al animal caliente hasta que se recupere envolviéndolo en una toalla de papel y colocándolo cerca de una bombilla de luz infrarroja.