Inyección estereotáxica de virus para la modificación genética estable en un modelo de ratón

Comience con un ratón anestesiado con un cráneo expuesto en un marco estereotáxico.

Baje el soporte de la jeringa hasta que la punta de la aguja se alinee con el bregma, un punto de referencia del cráneo.

Usando las coordenadas estereotáxicas predeterminadas, ubique la zona ventricular-subventricular o

V-SVZ, un nicho neurogénico que contiene principalmente células madre neurales o NSC, y marque esta región.

Retire la jeringa y taladre con cuidado un pequeño agujero, evitando daño cerebral.

Llene una jeringa estéril con virus que transportan el transgén y coloque la aguja sobre la superficie del cerebro.

Vuelva a colocar la jeringa y bájela hasta que la punta toque la capa superficial más interna del cerebro.

Penetre en el cerebro para llegar a la V-SVZ, inyecte lentamente el virus, sostenga brevemente y luego retire la jeringa.

En la V-SVZ, el virus ingresa a las NSC a través de la fusión de membranas. Su ARN inverso se transcribe en ADN.

Este ADN luego se integra en el genoma de NSC, lo que permite una modificación genética estable de las NSC.

Después de anestesiar, un ratón de seis a ocho semanas se afeita el área entre las orejas. A continuación, desinfecte la piel con un yodóforo como p