Transferencia de genes a las células de Schwann del nervio ciático de roedores mediante electroporación

Comience con una rata neonatal anestesiada colocada en una almohadilla térmica con un nervio ciático expuesto.

Levante el sitio distal del nervio e inyecte una solución de ADN plasmídico mezclada con un tinte. El tinte ayuda a rastrear la administración de plásmidos.

Coloque un electrodo tipo pinza alrededor del nervio, manteniendo un pequeño espacio entre los brazos del electrodo.

Introduzca solución salina en este espacio para la conducción de corriente.

Aplique un pulso eléctrico que rodee las fibras nerviosas que crea poros transitorios de membrana en las células de Schwann. Luego, invierte las posiciones de los electrodos y aplica un segundo pulso eléctrico. Esto mejora la entrada de ADN plasmídico a través de los poros.

Después de la electroporación, la membrana celular vuelve a sellar y atrapa el plásmido.

Limpie el sitio, selle la incisión de la piel, desinféctela y deje que la rata se recupere.

Más tarde, el ADN plasmídico se transloca al núcleo y se integra en el ADN de la célula de Schwann, lo que permite una transferencia de genes exitosa.

Tire suavemente del lado distal del nervio con una aguja para levantar el nervio expuesto. Inserte la micropipeta de vidrio en el sitio distal del nervio e inyecte la solución de ADN aplicando una ligera presión positiva hasta que el nervio aparezca verde. A continuación, coloque un electrodo de platino tipo pinza a aproximadamente uno o dos milímetros del nervio.

Llene el espacio entre el electrodo y el nervio con una solución de cloruro de sodio al 0,9%. Aplique pulsos eléctricos en el lugar de la inyección con un electroporador. Después del primer ajuste de pulsos, invierta el electrodo y aplique otro conjunto de pulsos.

Luego, limpie el sitio de electroporación con una solución de cloruro de sodio al 0,9%. Después de la electroporación, cierre la incisión con pegamento de cianoacrilato. Luego, limpie la herida con povidona yodada.

Retire la mascarilla del animal y manténgala en el calentador eléctrico durante al menos una hora para permitir la recuperación completa de la anestesia