Trasplante estereotáxico de suspensión de células neurales en un ratón con lesión cerebral traumática

Comience con una jeringa precargada conectada a una bomba de jeringa estereotáxica.

La jeringa contiene una suspensión de células neurales derivadas de células madre pluripotentes inducidas por humanos.

Coloque la aguja sobre la corteza cerebral expuesta quirúrgicamente de un ratón con lesión cerebral traumática.

Baje la jeringa para tocar la duramadre con la punta de la aguja, ajuste las coordenadas para apuntar al sitio de la lesión y retraiga ligeramente. Ahora,

cree una pequeña incisión, estableciendo un punto de entrada para la aguja.

A continuación, baje el émbolo para permitir el flujo de la suspensión celular.

Baje la aguja y penetre en el cerebro para llegar al borde de la materia gris-materia blanca de la corteza profunda.

Finalmente, infunda lentamente la suspensión celular mientras irriga el sitio quirúrgico con solución salina para mantener la hidratación.

Al finalizar, retire la aguja, vuelva a irrigar y cierre la incisión.

Con el tiempo, las células trasplantadas maduran, restauran los circuitos neuronales y reparan el daño cerebral.

Aproximadamente 24 horas después de la craniectomía, vuelva a colocar el ratón en el marco estereotáxico.

Cubra el ratón con el paño quirúrgico fenestrado. Lave el sitio de la incisión con solución salina estéril para limpiar el sitio y aflojar las suturas. Use un hisopo de algodón empapado en etanol al 70% para esterilizar suavemente el sitio de la incisión y use pinzas finas y tijeras oftálmicas para quitar las suturas.

Luego irrigar el sitio de la cirugía y la craniectomía con abundante solución salina estéril. En una campana de bioseguridad para cultivos celulares, agite o golpee suavemente el tubo de células para garantizar una suspensión celular homogénea. Utilice una micropipeta para cargar aproximadamente 7,5 microlitros de células en una jeringa Hamilton a través del extremo del émbolo.

Sosteniendo la jeringa en un ángulo de 120 grados con el extremo del émbolo hacia abajo, inserte el émbolo teniendo cuidado de no introducir una burbuja de aire entre la suspensión y la punta del émbolo. Conecte el conjunto de juntas a la aguja de la pipeta y conecte la aguja a la jeringa. Empuje el émbolo para mover la suspensión celular a la aguja de la pipeta y conecte la jeringa a la bomba de jeringa estereotáxica.

Avance el émbolo para asegurarse de que el conjunto de la bomba de jeringa funcione correctamente y mueva la aguja a las coordenadas para la inyección. Alinee la punta de la aguja con bregma y establezca las coordenadas x e y en cero. Mueva la punta de la aguja sobre la craniectomía a dos milímetros laterales y menos un milímetro posterior al bregma y toque la superficie de la duramadre con la punta de la aguja.

Levante la aguja ligeramente y luego haga una pequeña incisión en la duramadre en el lugar donde la aguja hizo contacto. Establezca la coordenada estereotáxica en z igual a cero y empuje el émbolo para confirmar que la suspensión celular fluye adecuadamente antes de introducir la aguja en el cerebro. Introduzca la aguja en el cerebro a una profundidad de z igual a menos 1,4 milímetros para colocar el injerto en el borde de la materia gris / materia blanca de la corteza profunda.

Encienda la bomba de jeringa para infundir la suspensión celular durante un período de 15 minutos. Use un microscopio de larga distancia de trabajo para monitorear el flujo de salida de la suspensión celular irrigando el sitio de la cirugía con solución salina estéril durante la inyección para mantener la hidratación del tejido. Cuando se hayan entregado todas las células, retire lentamente la aguja de trasplante e irrige el sitio de la cirugía con solución salina adicional antes de cerrar la incisión con nuevas suturas.

Luego brinde atención postoperatoria como se demuestra.