Transducción lentiviral de células progenitoras neurales para la regulación epigenética de la expresión de alfa-sinucleína

Descongele las células progenitoras neurales o NPC almacenadas con un crioprotector en un bloque térmico.

Estas NPC expresan un aumento de alfa-sinucleína, un factor clave en la enfermedad de Parkinson.

Transfiera las células descongeladas a un tubo que contenga medios basales tibios para diluir el crioprotector.

Centrifugar para granular las células, eliminar el sobrenadante y volver a suspender el sedimento en medios neuronales.

Agregue la suspensión celular a una placa multipocillo recubierta de ECM e incube para permitir la adhesión y proliferación celular.

Agregue vectores lentivirales que contengan ARN guía, metiltransferasa Cas9-DNA desactivada y un gen de resistencia a los antibióticos.

Incubar para facilitar la entrada viral, la transcripción inversa del ARN viral, la integración en el genoma del huésped y la expresión transgénica.

El ARN guía dirige dCas9 al gen de la alfa-sinucleína, donde la metilación del ADN mediada por metiltransferasa reduce la expresión de alfa-sinucleína.

Reemplace el medio con medios neuronales que contengan antibióticos para seleccionar células transducidas, mientras que las células no transducidas sufren apoptosis.

Coloque un Cryovial con MD NPC en un b