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Microbiología
0 vistas • 2:25 min • August 29th, 2025
Comience con una matriz de micropocillos recubierta con una capa inerte a través de su superficie plana.
Agregue una suspensión de células bacterianas a la matriz, permitiéndoles asentarse en los pocillos.
Despegue el recubrimiento para eliminar las células unidas a la superficie, reteniendo las localizadas dentro de los pocillos.
Luego, asegure la matriz de micropocillos entre espaciadores.
Tome un portaobjetos con un recubrimiento no adhesivo y deposite una solución precursora de hidrogel que contenga un polímero sintético y un reticulante disuelto en un tampón sobre él.
Invierta el portaobjetos en la matriz e incube. El reticulante reacciona con el polímero para formar un hidrogel poroso que atrapa las células.
Retire el portaobjetos y coloque la matriz en un medio que favorezca el crecimiento bacteriano y contenga antibióticos para evitar la contaminación.
Las bacterias confinadas proliferan en colonias espacialmente distintas.
El hidrogel contiene enlaces cruzados fotodegradables que se rompen al exponerse a la luz ultravioleta, lo que permite la degradación específica del hidrogel para la extracción selectiva de colonias bacterianas.
Siembre 700 microlitros de suspensiones de células bacterianas con OD 600 de 0,1 sobre el sustrato de la matriz de micropocillos y haga la solución precursora de hidrogel como se demostró anteriormente utilizando 12,5 microlitros de ATGN salino tamponado con fosfato de pH ocho. Pipetee 12,5 microlitros de la solución precursora en un portaobjetos de vidrio perfluoroalquilado no reactivo y coloque dos espaciadores de acero de 38 micrómetros en dos lados opuestos del sustrato de matriz de micropocillos inoculado con células. A continuación, invierta el portaobjetos de vidrio perfluoroalquilado con la gota de solución precursora y coloque una gota en el centro del sustrato del micropocillo.
Cuando el hidrogel se forma después de una incubación de 25 minutos a temperatura ambiente, retire suavemente el portaobjetos de vidrio del sustrato del micropocillo y coloque el sustrato en una placa de Petri que contenga medios ATGN suplementados con antibiótico.