Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:30 min. • August 29th, 2025
Tome un lisado de células bacterianas que contenga componentes celulares, incluido el ARNs marcado con MS2 unido a su ARN objetivo.
El ARNs marcado con MS2 es un ARN regulador pequeño diseñado que lleva un bucle de tallo de aptámero MS2 en su extremo 5 ', que exhibe una alta afinidad por la proteína de la cubierta viral MS2.
Transfiera el lisado bacteriano a una columna de cromatografía de afinidad preequilibrada que contenga resina de amilosa unida a proteínas de fusión compuestas por proteína de unión a maltosa (MBP) y la proteína de recubrimiento MS2.
La proteína de la cubierta de MS2 inmovilizada captura específicamente el bucle del tallo del aptámero del ARNs marcado con MS2, reteniendo el ARNs objetivo unido al ARN intacto.
Las moléculas no etiquetadas que permanecen sin unir se recogen en el flujo continuo.
Lave la columna con tampón para eliminar las moléculas residuales no unidas.
Eluir con un tampón que contenga maltosa, que desplaza a MBP de la resina, liberando el ARNs marcado con MS2 unido a su ARN diana.
Recolecte y almacene las fracciones en hielo para preservar la integridad del ARN para el análisis posterior.
Retire la punta de la columna, luego coloque una columna de crom
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