Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:25 min. • August 29th, 2025
Comience con cepas bacterianas patógenas cultivadas en placas de agar separadas.
Cada cepa porta diferentes mutaciones en los genes responsables de producir una cápsula, una capa protectora de polisacáridos.
Transfiera las colonias individuales de las placas a tubos separados que contengan un medio líquido rico en nutrientes e incube.
Durante la incubación, las bacterias entran en la fase de crecimiento exponencial y expresan los genes productores de cápsulas.
Las mutaciones en estos genes dan como resultado variaciones en la producción de cápsulas, generando células no encapsuladas, débilmente encapsuladas y muy encapsuladas.
Transfiera los cultivos y centrifugue para granular las células.
Las células no capsuladas y débilmente encapsuladas forman gránulos densos, mientras que las células muy encapsuladas,
debido a su capa de cápsula hidratada, forman un gránulo menos denso.
Retire con cuidado el sobrenadante para evitar perder las células muy encapsuladas.
Agregue un tampón, centrifugue nuevamente y deseche el sobrenadante para eliminar el medio residual.
Vuelva a suspender las células en el tampón para estabilizar las bacterias sin promover un mayor crecimiento, preservando así la estructura de la cápsula.
Seleccione una sola colonia de una placa de caldo con un asa estéril e inocule 10 mililitros de un caldo apropiado.
Incube el cultivo durante la noche. Luego transfiera el cultivo a un tubo de 15 mililitros y centrifugue. A continuación, deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el gránulo en dos mililitros de PBS.
Repita la centrifugación y deseche el sobrenadante resultante. Luego vuelva a suspender el gránulo en dos mililitros de PBS.