Ensayo in vivo para correlacionar la bioluminiscencia bacteriana con la densidad celular
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:37 min. • August 29th, 2025
Tomemos las colonias bacterianas transformadas con un plásmido que contiene un gen inducible.
Elija una sola colonia para inocular medios líquidos frescos.
Incubar con agitación para oxigenación y crecimiento bacteriano homogéneo.
Utilice una muestra de cultivo diluida para medir la absorbancia y estimar la densidad celular.
Tome una placa de pocillos con fondo de vidrio de paredes negras para evitar la diafonía de luz entre las muestras, lo que garantiza una cuantificación precisa de la luminiscencia.
Agregue el cultivo bacteriano con la concentración celular deseada en los pocillos.
Agregue un antibiótico para mantener la retención de plásmidos.
Agregue un inductor para iniciar la expresión génica.
El gen codifica una enzima que reacciona con una proteína bacteriana específica para producir luz, lo que le da a la bacteria propiedades bioluminiscentes.
Coloque una tapa en la placa para evitar la evaporación antes de colocarla en un lector de placas con temperatura controlada con modo de agitación constante.
A intervalos regulares, registre la absorbancia para medir el número de células y la intensidad de la luz para monitorear la bioluminiscencia. Correlacionar la densidad celular con la bi
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