Cultivo de bacterias Magnetospirillum y evaluación de su comportamiento magnetotáctico

Los magnetospirillum son bacterias móviles que prosperan con poco oxígeno.

Producen nanocristales magnéticos que actúan como dipolos magnéticos, ayudándolos a navegar por el campo geomagnético hacia una concentración óptima de oxígeno.

Para cultivar Magnetospirillum, tome medios líquidos libres de oxígeno. Inyecte un volumen controlado de oxígeno para establecer condiciones microaeróbicas, agregue bacterias e incube.

Con el tiempo, la turbidez aumenta, lo que indica el crecimiento bacteriano.

Para preparar un cultivo semisólido, utilice un medio que contenga un indicador de oxígeno rosa que se vuelve incoloro en la zona de bajo oxígeno, marcando la interfaz óxico-anóxica (OAI) con una concentración óptima de

oxígeno.

Inocular las bacterias en el OAI, sellar el tubo e incubar.

Las bacterias se multiplican para formar una banda que migra hacia arriba a medida que se consume oxígeno.

Para evaluar el comportamiento magnetotáctico, prepare una gota colgante de las bacterias cultivadas y coloque un imán cerca de ella.

Bajo un microscopio, observe la natación direccional hacia el imán y la inversión del movimiento cuando se voltea el imán.

Para inocular las cepas MSR-1, AMB-1 y MS-1 en medio líquido, flamee la parte superior de las botellas de oxígeno y medio fresco aplicando etanol en los tapones y pasándolos a través de la llama de un mechero Bunsen.

Con una jeringa estéril y una aguja, extraiga un mililitro de oxígeno de la botella de oxígeno y transfiéralo a la botella de medio fresco. Si usa el inóculo de otro cultivo cultivado en una botella de vidrio, encienda ambas botellas. Luego inocular un mililitro del cultivo más antiguo en el medio fresco.

Incube el cultivo a 32 grados centígrados e inocularlo en medio fresco después de cuatro a siete días. Para inocular MSR-1 en gradiente de oxígeno, medio semisólido, verifique que el tubo de medio fresco muestre un OAI bien definido, materializado por una interfaz de color rosa a incoloro de aproximadamente uno a tres centímetros por debajo de la superficie del medio. Si el inóculo proviene de otro cultivo semisólido con gradiente de concentración de oxígeno, coseche las bacterias aspirando 50 microlitros del cultivo con una punta de pipeta estéril colocada en la banda formada por las bacterias.

Inocular lentamente estas bacterias en el OAI en el medio fresco, evitando perturbar la interfaz. Selle el tubo y deje que las bacterias crezcan entre 25 grados centígrados y 30 grados centígrados. Para asegurarse de que las bacterias sean magnéticas y modales, coloque una gota de cultivo en el cubreobjetos del microscopio.

Voltee el cubreobjetos e instálelo en una junta tórica que descanse sobre un portaobjetos de vidrio. Asegúrese de que la gota no toque la diapositiva inferior. Coloque la gota colgante bajo un microscopio y concéntrese en un borde de la gota.

Coloque el polo sur de un imán cerca de ese borde y observe cómo las bacterias nadan hacia el borde. Voltea el imán para que naden en la dirección opuesta.