Cultivo de Mycobacterium tuberculosis en condiciones limitadas por el hierro

Comience con una placa de agar que contenga colonias de Mycobacterium tuberculosis cultivadas en un medio enriquecido con nutrientes.

Inocular una sola colonia en un caldo suplementado con nutrientes e incubar con agitación para un crecimiento uniforme.

Permita que el cultivo alcance la fase logarítmica tardía, donde las células son metabólicamente activas.

Pipetear un pequeño volumen en una placa de agar enriquecida, extenderlo uniformemente e incubar hasta que se forme una capa bacteriana continua.

Humedezca un hisopo estéril con un medio mínimo bajo en hierro (LIMM) y recoja las bacterias.

Suspenderlos en un recipiente de plástico que contenga LIMM para evitar la contaminación por hierro.

Agregue un agente dispersante para evitar la formación de grumos e incube sin agitar.

En condiciones limitantes de hierro, las bacterias activan respuestas al estrés y producen sideróforos en el citoplasma.

Estos se empaquetan en vesículas extracelulares y se liberan en el entorno.

Los sideróforos capturan hierro y ayudan a las bacterias a sobrevivir.

Este sistema destaca la adaptación y supervivencia de las micobacterias en condiciones limitadas por el hierro

Inocular una sola colonia de MTB en dos milil