Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:46 min. • September 26th, 2025
Tome un cultivo de Mycobacterium tuberculosis cultivado en un medio limitante de hierro para mejorar la secreción de vesículas extracelulares que contienen sideróforos, un quelante del hierro.
Centrifugar para peletizar las bacterias.
Recoge el sobrenadante y fíltralo para eliminar las bacterias residuales.
Transfiera el filtrado a un sistema de ultrafiltración agitada y un filtro para eliminar el exceso de medios y concentrar los vehículos eléctricos.
Centrifugar el concentrado para granular los desechos celulares.
Transfiera el sobrenadante a un tubo de ultracentrífuga y centrífuzcalo para recoger el gránulo EV.
Deseche el sobrenadante, vuelva a suspender el gránulo en un tampón y mézclelo con un medio de gradiente de densidad concentrado para formar la capa inferior.
Superponga con concentraciones decrecientes del medio de gradiente para crear un gradiente de densidad discontinuo.
Agregue tampón en la parte superior y centrifuge. Los vehículos eléctricos migran a la capa que coincide con su densidad flotante.
Recoja cada fracción en un tubo separado.
La fracción purificada con VE que contienen sideróforos está lista para estudios posteriores.
Transfiera el cultivo a cinco tubos de centrífu
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