Aislamiento y enriquecimiento de vesículas extracelulares derivadas de la membrana externa de bacterias

Comience inoculando una colonia de bacterias genéticamente modificadas en un medio líquido.

Estas bacterias expresan una proteína de fusión fluorescente en la membrana externa, una capa protectora externa.

Incubar para que las bacterias liberen vesículas extracelulares (EV), nanoestructuras unidas a la membrana involucradas en la comunicación intercelular, que incorporan la proteína fluorescente.

Transfiera el cultivo a una botella y centrifugue a baja velocidad para granular las células.

Transfiera el sobrenadante que contiene EV, proteínas celulares y desechos celulares. Centrifugar a alta velocidad y eliminar los residuos que contienen sobrenadante.

Filtre el sobrenadante a través de una membrana para eliminar cualquier bacteria y residuo restante.

Inocular una muestra en agar e incubarla. La falta de formación de colonias bacterianas confirma la ausencia de bacterias.

Transfiera la solución a un dispositivo de ultrafiltración con una membrana semipermeable y una centrífuga para atrapar los VE mientras elimina las proteínas más pequeñas.

Recoja los vehículos eléctricos concentrados en un tubo para su posterior análisis.

Comience inoculando colonias individuales de Escherichia coli en 250