Aislamiento de vesículas extracelulares bacterianas mediante cromatografía de exclusión por tamaño

Tome una cromatografía de exclusión de tamaño o una columna SEC llena de perlas de resina porosa de tamaño definido. Contiene un depósito de muestra en la parte superior.

Agregue solución salina tamponada con fosfato o PBS para equilibrar las perlas de la columna y deseche el flujo continuo.

Cargue un filtrado de cultivo bacteriano concentrado que contenga vesículas extracelulares o EV, proteínas secretadas y contaminantes.

Los VE son nanovesículas a base de lípidos que transportan moléculas bioactivas y son secretadas por bacterias.

Una vez que el filtrado ingrese a las perlas, agregue PBS para conducirlo a través del lecho de resina.

Deseche el eluido inicial que contiene contaminantes no vesiculares grandes.

Coloque un tubo de recolección debajo de la salida y agregue PBS secuencialmente.

Los vehículos eléctricos de gran tamaño evaden los poros de resina más pequeños, se mueven a través de los espacios entre partículas entre las perlas y eluyen primero.

Las proteínas y contaminantes más pequeños ingresan a los poros, siguen caminos más largos y se eluyen más tarde.

Recolecte las fracciones de elución temprana que contienen EV y guárdelas para su análisis.

Para el aislamiento de los EV, re