Evaluación de la unión neumocócica a células endoteliales humanas primarias bajo flujo constante de medios

Coloque un portaobjetos de canal recubierto de gelatina, conectado a una bomba microfluídica, en una platina de microscopio.

El portaobjetos contiene células endoteliales humanas primarias cultivadas bajo medios fluidos, con cadenas de factor von Willebrand o VWF, una glicoproteína, en la superficie celular.

Estas cuerdas se generan estimulando las células con histamina.

El flujo controlado de medios, aplicado a través de la bomba microfluídica, promueve la secreción y el desenrollado de VWF. Esto expone dominios de enlace específicos en las cadenas VWF.

Detenga el flujo de medios, agregue un anticuerpo específico de VWF conjugado con fluoróforo verde y reanude el flujo para marcar las cadenas con el anticuerpo.

Pausa el flujo de medios e introduce bacterias neumocócicas que expresan proteínas fluorescentes rojas.

Reinicie el flujo para distribuir las bacterias, lo que permite la adhesión a los dominios expuestos a través de adhesinas superficiales.

Usando microscopía de fluorescencia, visualice la unión bacteriana en tiempo real a las cuerdas.

Detenga el flujo de medios y adquiera imágenes de pila Z para cuantificar la unión bacteriana a las células endoteliales.

Para una visualización mic