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Microbiología
0 vistas • 2:39 min • September 26th, 2025
Comience con embriones de pez cebra anestesiados inyectados con bacterias patógenas marcadas con fluorescencia, ya sea solas o mezcladas con microesferas de biomateriales, para modelar la infección asociada a biomateriales in vivo.
Coloque una placa de Petri que contenga medios basales con anestésico en la platina de un microscopio de fluorescencia estereoscópica equipado con filtros apropiados.
Agregue una solución de metilcelulosa a la placa para crear un medio viscoso que inmovilice los embriones para obtener imágenes.
Transfiera embriones individuales a la metilcelulosa y alinéelos horizontalmente, asegurando que el lugar de la inyección sea visible.
Usando el filtro de campo claro, concéntrese en el sitio de inyección para apuntar a la región infectada.
Establezca los parámetros de imágenes de la pila Z y adquiera imágenes de fluorescencia a diferentes profundidades para capturar la dinámica de la infección en tres dimensiones.
Usando software, analice las imágenes capturadas a lo largo del tiempo para cuantificar la intensidad de la fluorescencia y monitorear la distribución bacteriana.
Este protocolo permite una comparación directa de la progresión de la infección en embriones vivos con y sin exposición a biomateriales.
Coloque una placa de Petri de 100 milímetros que contenga medio E3 suplementado con tricaína al 0,02% en una platina de microscopio de fluorescencia estereoscópica y agregue 500 microlitros de metilcelulosa al 2% en la placa de Petri. Para monitorear el progreso de la infección mediante microscopía de fluorescencia, equipe los filtros fluorescentes y de campo claro apropiados, alinee los embriones infectados anestesiados horizontalmente en un punto de metilcelulosa en una placa de Petri.
Utilice el filtro de campo claro para enfocar el tejido inyectado dañado con un aumento de 160x. Establezca la profundidad de la pila Z en 10 micrómetros y el tamaño del paso en cinco micrómetros para permitir la grabación de tres imágenes consecutivas. Luego, obtenga imágenes de los embriones individuales con configuraciones optimizadas idénticas con un aumento de 160x.
Utilice el complemento ObjectJ en ImageJ para analizar las imágenes.
Este estudio presenta un método para visualizar la dinámica de la infección en embriones de pez cebra anestesiados mediante bacterias patógenas marcadas con fluorescencia. El protocolo permite una comparación directa de la progresión de la infección en embriones vivos con y sin exposición a biomateriales.
La imagen cuantitativa por fluorescencia en embriones de pez cebra permite la visualización directa y la medición in vivo de la dinámica de infecciones bacterianas asociadas a biomateriales. Este enfoque facilita la validación temprana de objetivos y la reducción mecanicista de riesgos en carteras de I+D de agentes antiinfecciosos y biomateriales. El método proporciona datos accionables para priorizar materiales e intervenciones candidatos según la progresión en tiempo real de la infección y las interacciones huésped-patógeno.
Este protocolo de imagen se integra en la continuidad desde el descubrimiento hasta la fase preclínica para la investigación y desarrollo de agentes antiinfecciosos y biomateriales, conectando estudios mecanicistas iniciales y pruebas de eficacia posteriores.
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Última actualización: 29 agosto 2026