Imágenes de fluorescencia de infección bacteriana asociada a biomateriales en embriones de pez cebra

Comience con embriones de pez cebra anestesiados inyectados con bacterias patógenas marcadas con fluorescencia, ya sea solas o mezcladas con microesferas de biomateriales, para modelar la infección asociada a biomateriales in vivo.

Coloque una placa de Petri que contenga medios basales con anestésico en la platina de un microscopio de fluorescencia estereoscópica equipado con filtros apropiados.

Agregue una solución de metilcelulosa a la placa para crear un medio viscoso que inmovilice los embriones para obtener imágenes.

Transfiera embriones individuales a la metilcelulosa y alinéelos horizontalmente, asegurando que el lugar de la inyección sea visible.

Usando el filtro de campo claro, concéntrese en el sitio de inyección para apuntar a la región infectada.

Establezca los parámetros de imágenes de la pila Z y adquiera imágenes de fluorescencia a diferentes profundidades para capturar la dinámica de la infección en tres dimensiones.

Usando software, analice las imágenes capturadas a lo largo del tiempo para cuantificar la intensidad de la fluorescencia y monitorear la distribución bacteriana.

Este protocolo permite una comparación directa de la progresión de la infección en embriones vivo