JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 3:12 min • September 26th, 2025
Comience con un plato que contenga una cámara de agarosa moldeada con ranuras.
Cada ranura contiene embriones de pez cebra anestesiados sumergidos en un medio embrionario complementado con un agente anestésico.
Bajo un microscopio óptico, inserte una aguja de microinyección en el tejido muscular.
Inyecte una suspensión que contenga microesferas de S. aureus y poliestireno para modelar una infección asociada al implante.
Transfiera los embriones inyectados a pocillos individuales de una placa de pocillos múltiples llena de un medio fresco e incube.
Las microesferas ofrecen una superficie física que favorece la colonización bacteriana y promueve la infección.
Para evaluar la infección bacteriana asociada al implante, transfiera cada embrión a un tubo separado y lávelo con un tampón. Agregue tampón y perlas de cerámica.
Homogeneizar para lisar los embriones y liberar el contenido interno, incluidas las bacterias.
Coloque los homogeneizados diluidos en placas, luego incube para permitir la formación de colonias.
Los embriones inyectados con la suspensión bacteriana de microesferas muestran recuentos de colonias más altos que los inyectados con la suspensión bacteriana sola. Esto indica que las microesferas aumentan la susceptibilidad a las infecciones.
Después de esperar cinco minutos para que los embriones sean anestesiados, alinee los embriones dentro de las ranuras en una sola orientación para su inyección. Coloque el microinyector en la configuración de inyección adecuada e inserte la aguja en el tejido muscular del primer embrión en un ángulo de 45 a 60 grados bajo un microscopio estereoscópico.
Mueva suavemente la aguja hacia adelante y hacia atrás para ajustar la posición dentro del tejido según sea necesario, y use el pedal del microinyector para inyectar la suspensión cargada. Al inyectar una suspensión de microesferas bacterianas en el tejido de embriones de pez cebra, la aguja debe insertarse suavemente pero con mano firme. Después de una inserción exitosa, se debe crear un espacio para los materiales antes de la inyección.
Y mantener los embriones en medio E3 sin tricaína en pocillos individuales de placas de 48 pocillos con cambios diarios de medio. Para monitorear la progresión de la infección mediante la cuantificación de unidades formadoras de colonias, transfiera al azar de cinco a seis embriones infectados viables en microtubos individuales de dos mililitros poco después de la inyección y lave suavemente los embriones con PBS estéril. Después de desechar los lavados, agregue 100 microlitros de PBS estéril a cada tubo, seguido de dos o tres perlas de circonio estériles de dos milímetros de diámetro.
A continuación, triturar los embriones en un homogeneizador a 3.500 rpm durante 30 segundos, y cultivar el homogeneizado como se ha demostrado.