Un método visual sensible para la detección de bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno

Comience con una placa que contenga una suspensión de varias bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno capaces de metabolizar compuestos ricos en azufre.

Agregue una solución de cloruro de bismuto que contenga L-cisteína como fuente de azufre e incube brevemente la mezcla.

Durante la incubación, las bacterias utilizan L-cisteína y producen sulfuro de hidrógeno, que reacciona con los iones de bismuto para formar un precipitado de sulfuro de bismuto negro insoluble.

Esta reacción cambia el color de la solución de amarillo claro a negro, lo que indica la producción de sulfuro de hidrógeno.

A continuación, realice el ensayo utilizando concentraciones variables de hidrosulfuro de sodio como patrón de sulfuro de hidrógeno y agregue cloruro de bismuto.

Esto genera un gradiente de color que va desde el negro claro hasta el negro intenso, que representa los niveles de sulfuro de hidrógeno.

Ahora, use este gradiente para comparar y estimar visualmente los niveles de sulfuro de hidrógeno en las muestras bacterianas, lo que permite la detección rápida de bacterias productoras de sulfuro de hidrógeno.

Mezcle 100 microlitros de cultivo bacteriano con 100 microlitros de solución de bismuto recién preparada en las placas de microtitulación de 96 pocillos y cultive durante 20 minutos a 37 grados centígrados. Para cada cepa bacteriana, realice el análisis por triplicado.

Después de 20 minutos, verifique si hay cambio de color. Si el color de la solución cambia de amarillo claro a negro, esto indica que la bacteria puede producir sulfuro de hidrógeno o H2S. Repita esta medición tres veces.

Determine la sensibilidad del método utilizando diferentes concentraciones de hidrosulfuro de sodio mezclado con solución de sulfuro de bismuto. Finalmente, determine la presencia de iones de bisulfuro y sulfuro observando la formación de un precipitado de sulfuro de bismuto negro. Marque el color de los pocillos utilizando una escala visual desde la producción de color sin color hasta la producción de color negro más oscuro.