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Microbiología
0 vistas • 2:30 min • September 26th, 2025
Tome un cultivo metabólicamente activo de Mycobacterium marinum. Esto asegura una alta viabilidad bacteriana y un estado fisiológico óptimo.
Centrifugar el cultivo para granular las bacterias.
Deseche el exceso de sobrenadante y vuelva a suspender el sedimento en un medio nuevo que contenga un agente dispersante.
Transfiera la suspensión a tubos de microcentrífuga y sonique en condiciones controladas.
La sonicación interrumpe los agregados bacterianos y dispersa las células, lo que da como resultado una suspensión unicelular viable.
Recoja la suspensión sonicada en una jeringa y pásela a través de un filtro de membrana para eliminar los grumos restantes, asegurando una población unicelular uniforme.
Con un espectrofotómetro, mida la densidad óptica de la suspensión bacteriana.
Diluya la suspensión con medios crioprotectores frescos para alcanzar la concentración bacteriana deseada y preservar la viabilidad celular.
Alícuota la suspensión unicelular final y guárdala a temperaturas ultrabajas. El crioprotector ayuda a mantener la viabilidad bacteriana durante el almacenamiento a largo plazo.
Después de la inoculación según el manuscrito, centrifugar el cultivo a 3000 veces G durante 10 minutos para recolectar el Mycobacterium marinum en forma de gránulos. Deseche todos menos 300 microlitros del sobrenadante y vuelva a suspender el sedimento.
Agregue tres mililitros de medio 7H9 con glicerol al 10% para volver a suspender aún más el gránulo y luego sonique la suspensión en un baño de agua a 100 vatios, con 15 segundos encendidos y 15 segundos apagados, durante un total de dos minutos para lograr un homogeneizado de una sola célula. Transfiera la suspensión bacteriana a una jeringa de 10 mililitros y pase por un filtro de cinco micras para eliminar cualquier grumo bacteriano. Con un espectrofotómetro, mida la densidad óptica de la suspensión y dilúyala con medios 7H9 que contengan glicerol al 10% a OD 600 a la vez.
Divida la suspensión en alícuotas de 10 microlitros y guárdela a 80 grados centígrados negativos para su uso posterior.