Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:30 min. • September 26th, 2025
Tome un cultivo metabólicamente activo de Mycobacterium marinum. Esto asegura una alta viabilidad bacteriana y un estado fisiológico óptimo.
Centrifugar el cultivo para granular las bacterias.
Deseche el exceso de sobrenadante y vuelva a suspender el sedimento en un medio nuevo que contenga un agente dispersante.
Transfiera la suspensión a tubos de microcentrífuga y sonique en condiciones controladas.
La sonicación interrumpe los agregados bacterianos y dispersa las células, lo que da como resultado una suspensión unicelular viable.
Recoja la suspensión sonicada en una jeringa y pásela a través de un filtro de membrana para eliminar los grumos restantes, asegurando una población unicelular uniforme.
Con un espectrofotómetro, mida la densidad óptica de la suspensión bacteriana.
Diluya la suspensión con medios crioprotectores frescos para alcanzar la concentración bacteriana deseada y preservar la viabilidad celular.
Alícuota la suspensión unicelular final y guárdala a temperaturas ultrabajas. El crioprotector ayuda a mantener la viabilidad bacteriana durante el almacenamiento a largo plazo.
Después de la inoculación según el manuscrito, centrifugar el cultivo a 3000 veces G durante 10 minuto
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