Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:48 min. • September 26th, 2025
Tome una cubeta que contenga una solución de trabajo de tioflavina T, un colorante fluorescente específico de amiloide, disuelto en solución salina tamponada con fosfato.
Coloque la cubeta en un espectrofluorómetro y registre la señal de fluorescencia de referencia.
Pausa la exploración y retira la cubeta.
Agregue el sobrenadante de cultivo esterilizado por filtro recolectado de células endoteliales pulmonares infectadas con bacterias virulentas de Pseudomonas .
El sobrenadante contiene agregados amiloides, que son proteínas mal plegadas y ricas en láminas beta.
Mezcle suavemente el contenido por inversión para asegurar una distribución uniforme.
Vuelva a cargar la cubeta en el espectrofluorómetro y reanude el escaneo para adquirir una señal de fluorescencia basada en el tiempo.
La tioflavina T se une específicamente a los amiloides ricos en láminas beta, lo que conduce a una mayor fluorescencia.
Realice un escaneo de fluorescencia con la misma configuración.
Un aumento en la fluorescencia en relación con la línea de base indica la presencia y abundancia relativa de amiloides inducidos por infección en el sobrenadante de cultivo.
Para cuantificar los amiloides dentro del sobrenadante, agregu
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