Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:20 min. • September 26th, 2025
Comience con una planta experimental con regiones foliares modificadas genéticamente que expresen grandes fragmentos no fluorescentes de proteína fluorescente verde superfolder o sfGFP.
Inyecte estas áreas modificadas con bacterias Pseudomonas que contienen proteínas efectoras marcadas con el pequeño fragmento no fluorescente de sfGFP.
Incubar para permitir la interacción entre las bacterias y las células de las hojas.
Usando un sistema de secreción especializado, Pseudomonas entrega las proteínas efectoras marcadas en el citosol de la hoja.
La proximidad entre los fragmentos de GFP grandes y pequeños permite su ensamblaje en sfGFP fluorescente funcional, que luego se transloca a la membrana plasmática.
Después de la incubación, extirpe los discos de las hojas de las áreas inyectadas.
Visualice estos discos con un microscopio confocal de barrido láser.
Inicialmente, obtenga imágenes del disco de la hoja a baja intensidad láser para minimizar la autofluorescencia. Luego, aumente la potencia del láser para mejorar la visibilidad.
La fluorescencia verde confirma la infección bacteriana exitosa y la entrega de proteínas efectoras en las células vegetales.
Para las hojas de Nicotiana benthamiana
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