Aislamiento de colonias bacterianas dirigidas mediante degradación de hidrogel con patrón de luz

Tome un cubreobjetos con una capa de hidrogel fotodegradable que contenga colonias bacterianas atrapadas, modificadas genéticamente para emitir fluorescencia.

Coloque el cubreobjetos en un soporte.

Agregue medios para evitar la deshidratación de la muestra.

Bajo un microscopio de campo claro, concéntrese en una sola colonia de interés.

Usando el software apropiado, diseñe un patrón de luz para la extracción celular en la periferia de la colonia para romper los enlaces estructurales del hidrogel y minimizar la exposición a los rayos UV de las células.

Ajuste la intensidad de la luz ultravioleta y la duración de la exposición.

Inicie la exposición a la luz ultravioleta para romper los enlaces estructurales en el hidrogel en las áreas expuestas que facilitan la liberación de la colonia objetivo.

Usando un filtro de fluorescencia, identifique la colonia.

Coloque una punta de tubo en el lugar, con el otro extremo conectado a una jeringa.

Cambie al modo de campo claro y, con la jeringa, aspire la colonia liberada.

Transfiera la colonia a un tubo para un análisis más detallado.

Coloque la muestra en un soporte de PDMS y agregue el medio definido encima de la muestra para evitar la deshidratación de