JoVE Encyclopedia of Experiments
Microbiología
0 vistas • 2:37 min • September 26th, 2025
Comience con dos cepas bacterianas, una referencia y un competidor, cada una de las cuales expresa un marcador fluorescente distinto para la identificación de cepas.
Mezcle las cepas en proporciones iguales y coloque la mezcla en una placa de agar.
Incuba la placa para permitir que las cepas crezcan e interactúen.
El competidor supera a la cepa de referencia a través de mecanismos dependientes o independientes del contacto.
En la competencia dependiente del contacto, el competidor utiliza sistemas de secreción especializados para administrar toxinas directamente a la cepa de referencia.
En la competencia independiente del contacto, el competidor libera toxinas que se difunden en el medio circundante y entran en la cepa de referencia.
Estas toxinas interrumpen procesos esenciales en la cepa de referencia, incluida la síntesis de la pared celular, la replicación del ADN y la síntesis de proteínas, lo que lleva a la detención del crecimiento, la muerte celular y la reducción de la expresión de fluorescencia.
Después de la incubación, examine la placa bajo un microscopio de fluorescencia.
La fluorescencia reducida en la cepa de referencia, en comparación con la fluorescencia más brillante del competidor, indica interacciones competitivas.
Para mezclar la cepa de referencia y la cepa de la competencia en una proporción de uno a uno, agregue 100 microlitros de cada cepa normalizada a OD 1.0 a un tubo de centrífuga de 1.5 mililitros etiquetado y vórtice durante uno o dos segundos. Como control, mezcle la cepa de referencia con una versión etiquetada diferencialmente de sí misma y también con un vórtice.
Es fundamental lograr la proporción inicial correcta, ya que puede cambiar considerablemente el resultado del experimento. Para garantizar el éxito, este paso puede requerir la optimización de una especie bacteriana determinada. Después de repetir este paso para cada réplica biológica, debe haber cuatro réplicas biológicas con cepas de referencia marcadas diferencialmente como controles y cuatro réplicas biológicas con cepas de referencia y competidoras marcadas diferencialmente.
Para hacer manchas de cultivo que se utilizarán para microscopía de fluorescencia después de la incubación, agregue 10 microlitros de cada mezcla experimental y de control en una placa de Petri que contenga agar LBS. Después de que las manchas se hayan secado por completo en el banco, incube las placas a 24 grados centígrados durante 24 horas.