Modelado de la colonización vaginal murina por bacterias anaeróbicas

Tomemos un ratón hembra tratado con una hormona que acondiciona el ambiente vaginal, aumentando su susceptibilidad a las infecciones.

Levanta al ratón por la cola mientras agarra la jaula con sus patas delanteras para elevar los cuartos traseros y exponer la abertura vaginal.

Enjuague la luz vaginal con un tampón anaeróbico para eliminar la mucosidad, una barrera protectora contra los patógenos, junto con las células epiteliales muertas y los microbios vaginales endógenos.

Inocular inmediatamente la vagina con una suspensión de un patógeno bacteriano anaeróbico, mientras mantiene al ratón restringido para minimizar la pérdida de líquidos.

Para la coinoculación, administre una suspensión de otro patógeno bacteriano anaeróbico usando el mismo volumen que antes.

Aloje al ratón inoculado por separado de los ratones no inoculados para evitar la contaminación cruzada.

Después de la inoculación, las bacterias se adhieren al epitelio vaginal, crecen en colonias y desarrollan una capa protectora de biopelícula que actúa como una barrera contra las respuestas inmunes del huésped.

Prepare los tubos de lavado vaginal en la cámara anaeróbica pipeteando 70 microlitros de PBS anaeróbico estéril en tubos de microcentrífuga de 1,5 mililitros etiquetados con números de ratón.

Cierre bien los tubos y sáquelos de la cámara. Para realizar el lavado vaginal, primero, coloque un ratón encima de una jaula que pueda agarrar con sus patas delanteras. Luego, agarre suavemente la parte media de la cola y levántela para que los cuartos traseros estén ligeramente elevados y la abertura vaginal quede expuesta.

Después de extraer 50 microlitros de PBS del tubo de lavado etiquetado, inserte suavemente la punta de la pipeta de dos a tres milímetros en la luz vaginal para lavarla con PBS pipeteando hacia adentro y hacia afuera tres o cuatro veces. Luego, transfiera el material de lavado nuevamente al tubo de lavado original con los 20 microlitros restantes de PBS sin usar. Inmediatamente después de este lavado vaginal, inocule a cada ratón transfiriendo por vía vaginal 20 microlitros de la suspensión bacteriana o el control del vehículo.

Para experimentos de co-inoculación con dos cepas bacterianas diferentes, inocular por separado con 10 microlitros de cada suspensión bacteriana, en lugar de mezclar las cepas de antemano. Para evitar que el volumen administrado se acumule inmediatamente en el introito vaginal, continúe sosteniendo la parte trasera del ratón durante 10 a 20 segundos. Transfiera el ratón inoculado a una nueva jaula o con compañeros de jaula ya inoculados, y repita el procedimiento con los otros ratones.