Ensayo de inundación de plántulas para detectar la resistencia bacteriana en tomates

Para detectar resistencia bacteriana en diferentes cepas de tomate, comience con plántulas de tomate de 10 días cultivadas en condiciones estériles.

Estas plántulas muestran hojas verdaderas emergentes y raíces establecidas.

Inundar ambas cepas con bacterias patógenas mezcladas con un tensioactivo para facilitar la propagación uniforme del inóculo en la superficie de la planta. Incline y agite la placa para maximizar el contacto de las plántulas con el inóculo.

Retire el exceso de inóculo, vuelva a sellar las placas e incube en una cámara de crecimiento.

Las bacterias ingresan a través de los estomas y colonizan el apoplasto, el espacio extracelular entre las células de las hojas.

Las bacterias inyectan proteínas efectoras en las células vegetales para suprimir las respuestas inmunitarias de las plantas.

Las cepas susceptibles no detectan estos efectores, lo que permite la proliferación bacteriana y el daño tisular vegetal inducido por toxinas bacterianas.

Las cepas resistentes reconocen los efectores y producen especies reactivas de oxígeno para matar las bacterias.

Después de la incubación, las cepas resistentes muestran un crecimiento sostenido, mientras que las cepas susceptibles muestran un desarrollo detenido.

Transfiera las placas con las plántulas de diez días de la cámara de crecimiento al gabinete de bioseguridad y retire la cinta quirúrgica. Luego transfiera seis mililitros de inóculo a cada plato.

Empuje suavemente las plántulas en el inóculo con la punta de una pipeta y encienda un temporizador durante tres minutos. Sostenga un plato en cada mano e incline la parte delantera del plato hacia abajo para sumergir los cotiledones y las hojas de las plántulas. Agite el inóculo de lado a lado de cinco a siete veces, luego incline las placas hacia atrás para cubrir las raíces con el inóculo.

Incline las placas hacia abajo nuevamente y repita el ciclo durante un total de tres minutos. Vierta el inóculo de las placas, colóquelas sobre una superficie plana y vierta cualquier inóculo residual por segunda vez. Vuelva a envolver las placas y colóquelas nuevamente en la cámara de crecimiento.