Suministro localizado de bacterias en la luz intestinal de una larva de pez cebra mediante microinyección

Tome un plato que contenga una larva de pez cebra anestesiada.

Aplique una gota de agarosa de bajo punto de fusión sobre la larva y colóquela suavemente lateralmente para permitir el acceso intestinal durante la inyección.

Ahora, enfríe brevemente la agarosa para solidificarla, inmovilizando así la larva.

Agregue medios que contengan un agente anestésico para mantener la larva bajo anestesia.

A continuación, tome una suspensión de Clostridioides difficile marcada con fluorescencia, una bacteria patógena, y agregue un tinte trazador para facilitar el monitoreo de la inyección.

Cargue esta mezcla en una aguja de microinyección y monte la aguja en un micromanipulador.

Bajo un microscopio estereoscópico, coloque la aguja en un ángulo dirigido hacia el intestino larvario.

Luego, inserte suavemente la punta de la aguja en la luz intestinal.

Inyecte las bacterias directamente en el lumen y confirme la administración exitosa con el tinte trazador. Luego, retraiga la aguja.

Usando microscopía de fluorescencia, confirme la localización de Clostridioides difficile en el intestino larvario.

Primero, coloque una gota de agarosa de bajo derretimiento al 0,8% sobre las larvas de pez cebra en una placa de P