Aislamiento y cultivo de bacterias Clostridioides difficile a partir de larvas de intestino de pez cebra

Comience con una larva de pez cebra sacrificada con un intestino infectado por Clostridioides difficile, una bacteria anaeróbica patógena.

Asegure el tronco dorsal superior de la larva y retire su cabeza para exponer los órganos internos.

Asegure el tronco dorsal medio y aísle suavemente el intestino de la cavidad corporal.

Transfiera el intestino aislado a un tubo de microcentrífuga que contenga tampón.

Homogeneizar el intestino con un mortero para alterar el tejido y liberar los microbios intestinales.

Transfiera el homogeneizado a un tubo que contenga medios de cría selectiva suplementados con antibióticos.

Incubar el homogeneizado en una cámara anaeróbica.

Las condiciones anaeróbicas inhiben el crecimiento de bacterias aeróbicas, mientras que los antibióticos se dirigen específicamente y suprimen el crecimiento de microbios intestinales anaeróbicos nativos.

Clostridioides difficile resiste estos antibióticos y prolifera en condiciones anaeróbicas.

Los nutrientes y factores de crecimiento en los medios de cría promueven aún más la división celular, lo que permite el crecimiento de Clostridioides difficile viables.

Después de sacrificar las larvas de pez cebra infectadas, inserte una aguja