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Microbiología
0 vistas • 2:46 min • September 26th, 2025
Comience con un cultivo líquido de Sporosarcina pasteurii en un medio rico en nutrientes.
Tome una solución madre de enriquecimiento que contenga urea, cloruro de calcio, cloruro de amonio y bicarbonato de sodio.
Agregue una porción del medio de enriquecimiento al tubo de cultivo bacteriano.
Agite los tubos para mezclar las células bacterianas y los nutrientes de manera uniforme.
Incube los cultivos enriquecidos en una incubadora sin agitación.
Sporosarcina pasteurii, una bacteria grampositiva del suelo, produce la enzima ureasa en presencia de urea.
La ureasa descompone la urea en iones de amonio y carbonato.
El cloruro de amonio y el bicarbonato de sodio ayudan a mantener un pH alcalino que favorece la precipitación mineral.
Los iones de carbonato reaccionan con los iones de calcio del cloruro de calcio para formar carbonato de calcio insoluble.
Este precipitado comienza a formarse alrededor de las células bacterianas y cristaliza en calcita, una forma cristalina estable.
Estos cristales se depositan como depósitos blancos en el fondo del tubo, lo que demuestra la precipitación de calcita inducida microbiológicamente, o MICP.
Transfiera nueve mililitros del cultivo líquido preparado a varios tubos de centrífuga esterilizados de diez mililitros. Prepare 100 mililitros de la solución madre de enriquecimiento externo utilizando una balanza analítica para medir cuidadosamente dos gramos por litro de urea, un gramo por litro de cloruro de amonio, 212 miligramos por litro de bicarbonato de sodio y 280 miligramos por litro de cloruro de calcio.
En un vaso de precipitados con medio fresco, combine todos los ingredientes excepto la urea y el autoclave. Después del autoclave, mezcle la urea con un mililitro de medio fresco y pase la solución a través de una jeringa equipada con un filtro de 0,2 micrómetros antes de agregarla al medio de enriquecimiento. Agregue un mililitro del medio de enriquecimiento con aditivos a los tubos de centrífuga esterilizados que contienen nueve mililitros del cultivo preparado.
Agite cada tubo e incube en una incubadora que no agite a 30 grados centígrados. Monitoree todas las unidades regularmente para detectar el inicio de la precipitación.