Identificación de alto rendimiento de polímeros repelentes de bacterias mediante cribado de microarrays

Coloque un portaobjetos de microarrays esterilizado y recubierto de agarosa con múltiples puntos de polímero en una placa de pocillos múltiples. La agarosa minimiza la unión bacteriana inespecífica.

Agregue un cultivo bacteriano mixto al portaobjetos e incube con agitación suave.

Las bacterias secretan distintas proteínas de adhesión que se unen a puntos de polímero favorables, lo que resulta en una unión bacteriana más fuerte y una colonización con el tiempo.

Por el contrario, los polímeros repelentes resisten la adsorción de proteínas y reducen la unión bacteriana.

Enjuague el portaobjetos con solución salina tamponada con fosfato o PBS para eliminar las bacterias sueltas.

Agregue DAPI para teñir el ADN de las bacterias adheridas a la superficie.

Lave el portaobjetos con PBS, séquelo y séllelo con un cubreobjetos adhesivo.

Esterilice la superficie exterior del portaobjetos con etanol.

Capture imágenes de campo claro para localizar los puntos de polímero. Luego, cambie al modo de fluorescencia para detectar la fluorescencia en los puntos de polímero.

Las manchas de polímero que exhiben una fluorescencia reducida indican una unión bacteriana mínima y se identifican como polímeros repelentes de bacterias.

Después de cultivar y preparar inóculos para los microarrays, de acuerdo con el protocolo de texto, coloque los microarrays de polímeros esterilizados UV en placas rectangulares de cuatro pocillos y agregue seis mililitros de cultivos bacterianos mixtos. Incube las placas a 37 grados centígrados con agitación suave durante cinco días. Después de la incubación, use PBS para enjuagar suavemente los microarrays dos veces.

Luego agregue un microgramo por mililitro de DAPI en PBS e incube durante 30 minutos. A continuación, transfiera los microarrays a una placa nueva de cuatro pocillos, cubra los microarrays con PBS y luego gire suavemente. Luego cambie el PBS una vez y repita el lavado.

Después de enjuagar, seque los microarrays bajo un flujo de aire, luego aplique una película de sellado y coloque los cubreobjetos de vidrio en los portaobjetos de microarrays. Cuando el pegamento esté seco, use etanol al 70% para esterilizar la superficie exterior. Usando un microscopio de fluorescencia, equipado con un subjetivo de 20x, capture imágenes individuales para cada punto de polímero en canales de campo claro y DAPI.