Preparación de inóculo bioluminiscente enterohemorrágico de Escherichia coli

Comience con una reserva congelada de Escherichia coli enterohemorrágica o EHEC, una bacteria intestinal patógena.

Estas bacterias llevan un plásmido que expresa luciferasa para imágenes bioluminiscentes en tiempo real y un gen de resistencia a antibióticos para la selección.

Estreche las bacterias en una placa de agar que contenga el antibiótico apropiado e incube para aislar colonias individuales portadoras de plásmidos.

Elija una sola colonia y cultívela en caldo suplementado con antibióticos. Incubar para propagar una población genéticamente uniforme y estable a los plásmidos.

Expanda el cultivo en condiciones aireadas para sincronizar las células en crecimiento logarítmico.

Controle el crecimiento bacteriano hasta alcanzar la densidad óptica deseada.

A continuación, centrifuga el cultivo para granular las bacterias.

Retire el sobrenadante y lave el gránulo con solución salina estéril.

Centrifugar de nuevo. Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender el gránulo en un volumen más pequeño de solución salina.

Esta suspensión concentrada de EHEC ya está lista para el seguimiento basado en bioluminiscencia.

Para comenzar, raye una reserva negativa de 80 grados Celsius de bacterias E. coli O1