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Microbiología
0 vistas • 3:28 min • September 26th, 2025
Tome un tanque que contenga un medio de crecimiento estéril con un pH ácido.
Transfiera una pantalla de malla con plántulas de plantas al tanque.
Selle con una tapa y cinta porosa para mantener la esterilidad y permitir el intercambio gaseoso.
Incubar agitando para airear el medio.
Inspeccione el medio para verificar la ausencia de turbidez, lo que indica que no hay contaminación bacteriana.
Detecte una muestra en una placa de cultivo e incube para observar la falta de crecimiento bacteriano, confirmando la ausencia de bacterias contaminantes.
Inocular con Agrobacterium, un patógeno vegetal, e incubar.
Las moléculas de señalización derivadas de las raíces de las plantas y el pH ácido activan una proteína sensora unida a la membrana bacteriana.
La activación induce la expresión génica, produciendo proteínas para la unión bacteriana a las superficies radiculares.
Después de la unión, Agrobacterium entrega un fragmento de ADN, conocido como ADN de transferencia (ADN-T), a las células vegetales a través de un sistema de secreción.
Tras la integración en el genoma de la planta, el ADN-T sintetiza moléculas de señalización que mejoran la colonización bacteriana.
En una campana de flujo esterilizada, vierta 18 mililitros de medio MS líquido esterilizado en autoclave en tanques de vidrio cilíndricos estériles con tapas estériles.
A continuación, use fórceps estériles para transferir suavemente cada cuadrado de malla con plántulas de 10 a 14 días de edad de la placa de Petri de medio semisólido a un tanque cilíndrico hidropónico. Las plántulas que se muestran aquí son de alfalfa. Selle las tapas de los tanques con cinta quirúrgica porosa.
Luego, cultive las plántulas a 22 a 24 grados centígrados con un fotoperíodo de 16 horas y agitando a 50 rpm. Antes de la inoculación, examine cuidadosamente el tanque con plántulas para detectar cualquier posible contaminación. El medio en los tanques no contaminados debe ser claro y transparente.
Si los tanques están turbios con contaminación, deséchelos y numere el resto de los tanques. Pruebe 20 microlitros de medio hidropónico de cada tanque numerado y colóquelo en una placa de Petri con caldo Luria o agar LB. Incube el plato a 28 grados centígrados durante 28 horas.
Inocular inmediatamente cada tanque hidropónico numerado con 50 microlitros de la suspensión de Agrobacterium tumefacians en cada tanque hidropónico numerado. Co-cultivar las plántulas y la bacteria A. tumefacians a 22 a 24 grados Celsius con un fotoperíodo de 16 horas y agitando a 50 rpm. Examine la placa LB manchada después de 12 y 28 horas de incubación para verificar la esterilidad del medio de crecimiento hidropónico.
Si hay alguna contaminación, no utilice el tanque numerado correspondiente inoculado con bacterias para realizar ensayos posteriores.