Preparación de esferoplastos de E. coli
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 4:30 min. • September 26th, 2025
Tome un cultivo de E. coli .
Diluir el cultivo en medios frescos e incubarlo para promover la división bacteriana.
A continuación, diluya el cultivo en un medio que contenga un inhibidor de la división bacteriana e incube.
Las bacterias continúan creciendo sin dividirse, formando filamentos alargados.
Transfiera el cultivo a un tubo nuevo, luego centrifugue para granular los filamentos y eliminar el sobrenadante.
Lave el gránulo con un estabilizador osmótico para evitar la lisis de esferoplastos. Retire la solución.
Agregue tampón, lisozima, ADNasa y un agente quelante secuencialmente. Incubar.
El agente quelante desestabiliza la membrana externa del filamento.
La lisozima degrada la capa de peptidoglicano expuesta, lo que hace que los filamentos pierdan forma y formen estructuras esféricas llamadas esferoplastos.
Además, la ADNasa degrada el ADN contaminante liberado por los filamentos dañados.
Agrega el estabilizador osmótico nuevamente, mezcla e incuba.
Transfiera la suspensión a un tubo que contenga tampón y centrífuga.
Elimine el exceso de sobrenadante y vuelva a suspender los esferoplastos en el tampón para el análisis posterior.
Para configurar un cultivo durante la noche, use una punta
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