Evaluación de la transcitosis de E. coli a través de monocapas epiteliales intestinales

Comience con un cultivo de E. coli aislado de recién nacidos con infecciones del torrente sanguíneo.

Centrifugar para granular las bacterias, desechar el sobrenadante y volver a suspender el pellet en un medio libre de antibióticos.

Tome un plato con un inserto transwell que contenga una monocapa de células epiteliales intestinales.

Mida la resistencia eléctrica a través de la capa celular con una sonda para confirmar la integridad de la monocapa.

Agregue la suspensión bacteriana en el inserto e incube.

Las bacterias se adhieren a las células epiteliales, se internalizan dentro de las vesículas y se transportan a través de las células al pozo inferior a través de un proceso llamado transcitosis.

Mida la resistencia eléctrica nuevamente; Un valor estable confirma una monocapa intacta durante la transcitosis.

Transfiera el inserto a un pocillo nuevo y recoja el medio del pocillo inferior anterior.

Coloque el medio recolectado en una placa de agar e incube para desarrollar las colonias bacterianas.

Cuente las colonias para determinar la extensión de la transcitosis de E. coli a través de la barrera epitelial intestinal.

Cada 30 minutos después de la inoculación, llene los nuevos pocillos con 50