Preparación e inducción de cultivos de Borrelia burgdorferi para la producción de partículas virales
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:17 min. • September 26th, 2025
Comience con un cultivo de una cepa genéticamente modificada de Borrelia burgdorferi, una bacteria patógena.
Esta cepa lleva ADN de bacteriófagos latente integrado en su genoma, que ha sido diseñado para incluir un gen diana que confiere resistencia a los antibióticos.
Añadir el antibiótico correspondiente e incubar el cultivo. El gen de resistencia a los antibióticos expresa una proteína que inhibe el antibiótico, asegurando que solo proliferen las bacterias que albergan el gen.
Una vez que el cultivo alcance la densidad deseada, centrifugar las células para granularlas y desechar el sobrenadante.
Vuelva a suspender el gránulo, introduzca un inductor químico e incube para inducir daño al ADN.
La respuesta de reparación del ADN resultante extirpa el ADN del bacteriófago, iniciando su replicación, expresión de proteínas estructurales y ensamblaje de nuevos viriones portadores del gen de resistencia a los antibióticos.
Centrifugar el cultivo nuevamente, desechar el sobrenadante y volver a suspender las células en un medio nuevo.
Las células bacterianas que contienen viriones maduros están listas para futuras aplicaciones.
Inocular 150 microlitros del clon apropiado de Borrelia burgdorferi en
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