Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:41 min. • September 26th, 2025
Comience con un gránulo bacteriano. Las bacterias contienen un gen que codifica una proteína iniciadora, pero carecen de un gen de resistencia a los antibióticos.
Vuelva a suspender el gránulo en agua fría para minimizar la degradación celular.
Tome un plásmido que lleve un gen de resistencia a los antibióticos y un gen diana. Este plásmido se llama plásmido suicida porque no puede replicarse sin la proteína iniciadora.
Agregue el plásmido a la suspensión bacteriana.
Transfiera la suspensión a una cubeta fría.
Inicie la electroporación aplicando un pulso de alto voltaje que interrumpa transitoriamente la membrana bacteriana, permitiendo que el plásmido entre.
Agregue medios de recuperación y transfiera la mezcla a un tubo de cultivo.
Incubar agitando.
Tome una placa de agar que contenga el antibiótico y coloque el cultivo en una placa.
La proteína iniciadora bacteriana se une al origen de la replicación, lo que permite que el plásmido se replique y exprese una proteína de resistencia a los antibióticos.
Esto permite que las bacterias con el plásmido sobrevivan y crezcan, facilitando la amplificación del plásmido.
Granular el cultivo de bacterias por centrifugación a 5.000 veces G y cuatro gra
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